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色谱分析技术:核心原理与方法辨析

日期:2025-07-23 浏览:9

色谱分析技术:核心原理与方法辨析

色谱法 (Chromatography) 并非指某一种单一技术,而是对一整套复杂混合物分离技术的统称。其核心思想在于,当混合物随流动的“流动相”通过一个固定的“固定相”时,混合物中的各个组分会因其物理化学性质的差异,在两相之间进行反复、动态的分配。这种分配概率的不同,导致了各组分在固定相中的迁移速度出现差异,最终如同不同水平的赛跑选手被赛道拉开距离一样,实现有效分离。

这个过程通常在一个被称为“色谱柱”的管道中进行。根据流动相的物态,色谱法主要分为两大分支:流动相为气体的气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 和流动相为液体的液相色谱 (Liquid Chromatography, LC)。而根据固定相的类型(固态或液态)以及由此决定的分子分离机制,色谱法的分类可以进一步细化,涵盖离子交换、亲和层析、凝胶过滤、疏水作用等多种原理。


图1 色谱法通用实验装置示意图

典型的色谱分析流程如上图1所示。样品混合物被注入色谱柱,由流动相携带通过。在色谱柱的出口处,检测器会连续监测流出物的变化,并将信号绘制成一张色谱图。这张图谱的横坐标是时间(t),纵坐标则代表到达检测器的分析物浓度或数量。

从这张图谱中,我们可以解读出关键信息。从样品注入到色谱峰顶出现的时间,被称为保留时间 (tr),它是鉴定特定分子种类的特征参数。而tm则代表不与固定相发生任何作用的流动相自身通过色谱柱所需的时间,常被称为“死时间”。通过对色谱峰进行积分,其峰面积则与该组分的总量成正比,从而实现定量分析。

在检测器方面,热导检测器 (TCD) 因其对几乎所有物质都有响应而被广泛使用。然而,若想获得更深层次的结构信息,将色谱与质谱联用 (例如GC-MS) 是一个极为强大的策略,它能在分离组分的同时,解析出其分子结构。

方法选择:GC与LC的应用场景权衡

在实际应用中,如何选择合适的色谱技术?

气相色谱 (GC) 特别适合于常规分析。它的优势在于分辨率高、分析时间短、成本相对较低,且样品需求量小(液体样品1-10 μL,气体样品0.2-10 μL)。其核心应用前提是,待测样品必须是挥发性的,或者能够在不分解的前提下被气化,通常要求沸点低于300°C。

液相色谱 (LC) 则弥补了GC的不足。当样品包含多种组分、挥发性差,或在高温下容易热解(热分解)时,LC便成为首选。它能够处理更广泛的样品类型,尤其在生物大分子、药物和高分子聚合物等领域不可或缺。

色谱法的局限与发展潜力

传统色谱法的一个固有局限是,其输出的色谱峰本身不具备丰富的结构信息,这与光谱学方法(如红外光谱、核磁共振)能够提供详尽分子结构细节的谱图形成鲜明对比。然而,这并不意味着色谱技术已经停滞不前。恰恰相反,检测技术的持续革新,尤其是与质谱等高信息通量技术的联用,使得色谱法正逐渐演变为一种功能强大的预处理或预分离手段,为后续更精密的分析奠定基础。要获得一张信噪比高、结果可靠的图谱,对样品制备、设备参数配置都有极高要求。这正是专业检测实验室的核心价值所在。

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派生技术:电泳

与色谱法利用相分配原理不同,电泳 (Electrophoresis) 则是利用带电分子在电场作用下,于固定介质中迁移率 (drift mobility) 的差异来实现分离。

当固定相为凝胶时,该技术被称为凝胶电泳 (Gel Electrophoresis, GE)。而当分离在毛细管内的水溶液中进行时,则称为毛细管电泳 (Capillary Electrophoresis, CE)。CE相较于传统的GE具有显著优势,它有效缓解了焦耳热效应带来的问题,并且毛细管本身起到了泵送系统的作用,使得整个系统更为高效和自动化。

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